El potrillo nace con todos los órganos linfoideos completos, histológica y anatómicamente, de acuerdo a Tizard (1987). Pero deberá recibir asistencia inmunológica, vía calostro materno, para tener una efectiva protección antinfecciosa, según Crawford y Perryman (I980). Esta cobertura será de 30-45 días, tiempo necesario para que los efectores de la inmunidad inespecífica, por ejemplo, algunos factores del sistema complemento, fagocitario mieloide o mononuclear, proteínas de fase aguda, fabricadas por el hígado estén presente en concentración adecuada, según Klovasa y col. (1981) y Pellerin (1982). O bien los efectores de la inmunidad humoral y/o celular se expresen cualitativa y cuantitativamente. Es en este momento en que el neonato de placentación completa, según Pennimpede (1987), se comenzará a defender efectivamente de la agresión, del medio ambiente, de acuerdo a Liu y col. (I984).
Es el principal propósito de este trabajo, aportar antecedentes para la elaboración de un Banco de Sueros o plasma equino. Para transferencia pasiva de la inmunidad materna filial (TPI), en los casos en que se presenten falla parcial o total (FP o FT) de la misma según Kruse y col. (1984). Ya que se ha demostrado que el 17-20% de potrillos nacidos la padecen y el 70% de éstos enferman o mueren, de acuerdo a Perryman y col. (1988) y Roberts y McGuire (I981). Es por ello que nos proponemos:
1º. Determinar si en la raza Árabe se obtienen niveles adecuados de Igs, en especial IgG, para ser usada como donante de plasma o suero. Si bien la bibliografía cita por un lado a la raza Árabe como de muy buenos niveles de IgG (entre 1.500-3.500 mg%) según Bauer y col. (1985) y Rousse (1986) por otro lado, esta misma raza está demostrada como asiento de inmunodeficiencias primarias y secundarias severas, según Pennimpede (1987).
2º. Estudiar fluctuaciones de los niveles de IgG a lo largo del período gestacional de las yeguas causados por variaciones individuales, hormonales, genéticos, etc., considerando que las hembras presentan mejores niveles que los machos, según Burton (1988) y Le Blanc y col. (1986).
3º. Analizar las posibles variaciones estacionales de la IgG de acuerdo a Scott y col. (1976), pues el impacto del cambio ambiental puede alterar el equilibrio de la fisiología del sistema inmune. Además existen factores integrales del ecosistema que deben ser analizados, pues influyen en la TPI como clima, régimen de lluvias, luz, presión atmosférica, según Le Blanc y col. (1992) y Gay y col. (1983).
4º. Comparar 3 técnicas alternativas de dosaje de inmunoglobulinas séricas (Gertsman y Capuci, 1986), que denotan la presencia de IgG de acuerdo a Bauer y Broooks (1990) y Bauer y col. (1985), con la técnica de referencia hasta el momento: inmunodifusión radial cuantitativa (IDRC) o técnica de Manccini y Carbonara (1985), según Clabough y col. (1989).
Muestras: provenían de un haras del noroeste de la Provincia de Buenos Aires, Argentina, cercano a la localidad de Recifes (Haras Cura-Malal). Esta zona correspondería a clima templado pampeano, con promedios anuales alrededor de 15ºC de temperatura, lluvias repartidas a lo largo del año, no menos de 500-1.000 mm anuales, con una estación sin precipitaciones (invierno), con amplitudes térmicas mayores y frecuentes heladas. El bioma de pastizal sería el correspondiente a esta zona, según Lorenzini y Balmaceda (1992).
Se contó con el suero de 22 yeguas Árabes adultas, 11 preñadas y 11 vacías. Sus edades oscilaron entre 4-18 años. En las grávidas, el número de gestaciones anteriores fue de 1 a 10 (Tabla 1), se les dio servicio, en julio-agosto, siendo su fecha probable de parto junio-julio del año siguiente. Se hicieron 4 muestreos estacionales: 1a extracción en primavera, a los 30-45 días de preñez, 2a extracción en verano, 90-180 días de preñez, 3a extracción otoño, 6-9 meses de preñez, y la 4a extracción en invierno 15 días antes del parto, con el objetivo de comprobar las posibles fluctuaciones de los niveles Ig a lo largo de un ciclo gestacional, de acuerdo a Le Blanc y col. (1992).
TABLA 1 DETALLE DE LAS YEGUAS ÁRABES QUE CONSTITUYEN LA MUESTRA
N° Orden |
Edad (años) |
Estado Gestatorio |
N° de Gestaciones |
1 |
5 |
P |
3 |
2 |
6 |
P |
3 |
3 |
4 |
V |
1 |
4 |
14 |
P |
5 |
5 |
5 |
P |
1 |
6 |
4 |
V |
1 |
7 |
10 |
P |
1 |
8 |
18 |
P |
10 |
9 |
6 |
P |
3 |
10 |
11 |
P |
3 |
11 |
11 |
V |
2 |
12 |
8 |
V |
2 |
13 |
16 |
V |
7 |
14 |
7 |
V |
- |
15 |
6 |
V |
2 |
16 |
16 |
V |
5 |
17 |
7 |
V |
3 |
18 |
7 |
V |
2 |
19 |
7 |
V |
4 |
20 |
4 |
P |
------ |
21 |
6 |
P |
2 |
22 |
12 |
P |
2 |
P = preñadas; V = vacías; N°= número. |
El suero fue obtenido por punción aséptica de la vena yugular, sin hemólisis y ni conservador, refrigerado a -4ºC y congelado a -20ºC hasta su procesamiento. Sólo se lo descongeló una sola vez, según Hudson y Chay (1989).
Durante toda la experiencia los animales estuvieron saludables y recibieron sus dosis de antiparasitarios y vacunas, como es de rutina en la zona, según Pennimpede (1991). De cada ejemplar, perfectamente identificado, se hicieron registros de valores individuales (Tabla 1).
Pruebas: las técnicas de dosaje de IgG sérica inespecífica fueron: IDRC, de acuerdo a Manccini y Carbonara (1965), precipitación con sulfato de zinc (PSZ), según Clabough y col. (1989); coagulación con glutaraldehído (GLUT) de acuerdo a Benson y col. (1991) y Cowles y col. (1991), electroforesis de proteínas serias sobre cellogel de acuerdo a Bauer y col. (1985) y Bauer y Brooks (1990), como allternativas. Se usó, IgG purificada por cromatografía de intercambio iónico (SIGMA Co. USA). El antisuero anti-IgG se obtuvo de conejo, de acuerdo a plan de inoculación de Hudson y Chay (1989). Todas las técnicas para comparar resultados fueron expresadas en mg%, según Bauer y col. (1985). Y en el caso del test de precipitación con sulfato de zinc, se procedió precipitando un suero de concentración de IgG conocida (por otro método), en mg% y construyendo una escala gráfica. De la interpolación se obtuvieron datos en mg% o mg/dl.
El método de cuantificación en unidades de sulfato de zinc se realizó según MacEwan y col. (1970).
En todos los casos se usaron 2 sistemas de cuantificación, uno gráfico y otro matemático, de acuerdo a la ecuación de la recta, con el programa de computación Grapher-Surpher (1992).
Análisis estadístico: con las medias de los datos obtenidos por las 4 pruebas se realizaron: varianza, que indicaría grado de dispersión respecto a la media y análisis de correlación, considerada como relación de 2 variables aleatorias en forma bidimensional con carácter probabilístico, según Capelletti (1991).
Están expresados en la tabla 2 y los gráficos 1 y 2; ellos podrían indicarnos que los mejores niveles de IgG, se denotan en los meses de primavera y verano, en gestantes respecto a las vacías por las 4 técnicas estudiadas. En cuanto los resultados de los análisis estadísticos, indican que las diferencias fueron significativas entre los lotes y épocas del año, y que los valores de correlación, expresados en la tabla 3 indican la mayor relación entre IDRC versus GLUT, en invierno, primavera y verano, y en otoño IDRC versus PSZ.
TABLA 2 CONCENTRACIONES DE IgG. RESULTADOS COMPARATIVOS POR 4 TÉCNICAS EN PRIMAVERA, VERANO, OTOÑO E INVIERNO
Estación |
Técnicas |
|||
Primavera |
IDRC |
ETF |
PSZ |
GLUT |
Preñadas |
1.755-0,3 |
1.731,9-0,1 |
1.856,2-0,1 |
1.920-0,1 |
Vacías |
1.690-0,1 |
1.721,1-0,1 |
1.631,4-0,1 |
1.640,2-0,1 |
-- |
||||
Verano |
IDRC |
ETF |
PSZ |
GLUT |
Preñadas |
1.896,9-0,1 |
2.109,3-0,1 |
1.996,7-0,1 |
1.790,3-0,1 |
Vacías |
1.707,1-0,1 |
2.009,9-0,1 |
1.940-0,2 |
1.730,1-0,1 |
-- |
||||
Otoño |
IDRC |
ETF |
PSZ |
GLUT |
Preñadas |
1.694,5-0,2 |
1.926,3-0,2 |
1.715,2-0,1 |
1.652,2-0,2 |
Vacías |
1.520,9-0,1 |
1.659,5-0,1 |
1.619,3-0,1 |
1.536,9-0,1 |
-- |
||||
Invierno |
IDRC |
ETF |
PSZ |
GLUT |
Preñadas |
1.496,1-0,2 |
1.780,1-0,4 |
1.318,9-0,3 |
1.421,5-0,2 |
Vacías |
1.398,9-0,1 |
1.740,9-0,2 |
1.219,7-0,2 |
1.196,3-0,1 |
IDRC = lnmunodifusión radial cuantitativa. ETF = electroforesis sérica. PSZ = precipitación con sulfato de zinc. GLUT = coagulación con gutaraldehído. |
Gráfico 1. Niveles de IgG en yeguas árabes primavera, verano, otoño, invierno. |
Gráfico 2. Niveles de IgG en yeguas árabes primavera, verano, otoño, invierno. |
TABLA 3 RESULTADOS DE LOS ENSAYOS DE CORRELACIÓN ESTADÍSTICA ENTRE IDRC VERSUS: GLUT, PSZ, ETF, EN LAS 4 ESTACIONES DEL AÑO
IDRC Versus/ |
GLUT |
PSZ |
ETF |
Primavera |
0,89 |
0,88 |
0,88 |
Verano |
0,89 |
0,88 |
0,88 |
Otoño |
0,79 |
0,88 |
0,79 |
Invierno |
0,94 |
0,93 |
0,91 |
IDRC = inmunodifusión radial cuantitativa. GLUT = coagulación con glutaraldehído. PSZ = precipitación con sulfato de zinc. ETF = electroforesis sérica. |
En el presente estudio hemos podido determinar que los niveles de IgG en las 22 yeguas Árabes del harás Cura-Malal, de la Provincia de Buenos Aires, fluctúan a lo largo del año, tanto en animales gestantes como en no gestantes; estas diferencias son significativas desde el punto de vista estadístico.
Las preñadas en cualquier época del año aventajan las concentraciones de IgG de las vacías, esto podría deberse a factores genéticos, hormonales, nutricionales y ambientales, sólo en la cercanía a la parición disminuyen sus niveles. Por su parte las yeguas no gestantes realizan un ciclo semejante pero de concentraciones más bajas. Los niveles de IgG comienzan a aumentar en .primavera, alcanzan sus valores máximos en verano, descienden en otoño y por último caen en el invierno. Esto podríamos interpretarlo como resultado de la influencia de factores genéticos, factores ambientales (luminosidad, humedad ambiente, lluvias, disponibilidad de pasturas frescas), factores nutricionales, etcétera.
Aunque existen diferencias en las concentraciones de IgG entre adultas jóvenes y adultas mayores, con mejores niveles en adultas jóvenes, ello no fue estadísticamente significativo. En el caso de las preñadas adultas presentan mejores niveles, cuanto mayor sea el número de gestaciones, pero como la muestra no fue extensa, en todos estos resultados no podemos generalizar. Por último, los análisis de correlación de IDRC con las 3 técnicas, indican que GLUT es la de mayores valores, pero en nuestro país hay que importarlo y es caro. Con importante correlación tenemos a PSZ, que es sencilla, rápida, de fácil cuantificación, el reactivo es barato y no hay que importarlo, es por lo tanto la técnica que recomendamos.
Se concluye que las 22 yeguas Árabes, del haras Cura-Malal, presentan niveles de IgG influenciados por: estado gestacional, época del año, factores genéticos o individuales y factores ambientales. En cuanto a las preñadas podemos observar que aumentan sus concentraciones hasta los 6 meses de gestación y disminuyen sus niveles cuando faltan pocos días para la parición. Además, de la comparación de las técnicas, surge la selección de GLUT o en su defecto PSZ.
En la actualidad, proseguimos nuestros estudios, realizando ensayos semejantes, pero en otras razas como: Criolla, Pura Sangre de Carrera y Polo, de acuerdo a nuestro principal propósito, el de organizar un Banco de Suero equino, al que recurran los productores, cuando se les presenten casos de hipogamaglobulinemia transitoria en potrillo, o bien tengan en su propio establecimiento donantes vivos con las características por nosotros marcadas.
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