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La Flora Bacteriana Normal del Ciego (FBNC) de las aves, es un complejo sistema ecológico constituido, en más de un 90%, por bacterias anaerobias estrictas y facultativas (Barnes, 1970; Barnes y Cols., 1972; Salanitro y Cols. (1973). Esta FBNC cumple una importante función en la nutrición de las aves, debido a su participación en algunos procesos metabólicos y síntesis de nutrientes (Williams y Fuller, 1971). Otra función está relacionada con la Exclusión Competitiva (EC). Este término, describe un fenómeno biológico referido a una temprana colonización del tubo digestivo de las aves por la Flora Bacteriana Normal y su posterior capacidad para impedir una reconolización por bacterias enteropatógenas (Snoeyenbos y Cols., 1979).

La EC ha sido demostrada para varios gérmenes enteropatógenos, a saber: Salmonella infantis (Nurmi y Rantal, 1973); Salmonella typhimurium (Lloyd y Cols., 1977); Salmonella heindelberg (Snoeyenbos y Cols., 1978); Salmonella enteriditis (Weynack y Cols., 1979) y seis cepas de Escherichia coli patógenas (Soerjodi y Cols., 1981).

El fenómeno se explica, fundamentalmente, a través de teorías basadas en la especificidad de unión entre las bacterias del tubo digestivo y la célula intestinal; esta unión se realiza a través de una fibra, sintetizada por la bacteria, denominada 'Pili' o 'Glicocalix' (Arp y Jensen, 1980; Costerton, 1978). Este fenómeno, sumado a procesos metabólicos tóxicos (Hughes, 1972) y competencia por nutrientes (Lloys y Cols., 1977) constituyen un importante mecanismo inespecífico de defensa para las aves.

Material y métodos

A. Material

1. Flora Bacteriana Normal del Ciego. Se obtuvo de los ciegos de 10 aves reproductoras broilers de 24 semanas de edad. Estas aves estaban serológicamente negativas a S. pullorumgallinarum y sin antecedentes de paratifosis.

2. Aves en Experimentación. Se utilizaron 180 pollitos de un día de edad provenientes del mismo plantel que las aves adultas, por lo que tenían los mismos antecedentes sanitarios. Ellos recibieron alimento de crianza, exento de proteína de origen animal. Se mantuvieron en dos criadoras de cinco pisos cada una (Petersime Modelo 25 SD), ubicadas en una dependencia aislada.

3. Medios de cultivo. Se utilizaron los medios de cultivo descritos por Williams y Cols. (1980) para el' aislamiento e identificación de salmonelas de origen aviar.

4. Cepa Salmonella typhimurium. Aislada en el laboratorio de Patología Aviaria de la Facultad de Ciencias Veterinarias de la Universidad de Chile.

B. Métodos

1. Controles previos a la experiencia

Se realizaron controles bacteriológicos según método descrito por Williams y Cols. (1980), para el aislamiento e identificación de salmonelas de origen aviar, a fin de descartar contaminación por salmonelas ajenas a la experiencia tanto de los pollitos, FBNC y alimento. Para el examen de los pollitos, se sacrificaron 20 de ellos al día de edad, tomándose muestras individuales de ciegos y 'pool' de algunos órganos: hígado, vitelo, corazón y bazo.

En el caso de FBNC, este material correspondió a la extracción de los ciegos asépticamente y triturados bajo constante burbujeo de nitrógeno. El macerado se diluyó al 50% en solución fisiológica estéril, previamente regenerada; para bacteriología se tomaron cinco muestras de 5 ml cada una.

El alimento se controló en cada saco usado en la experiencia, tomándose tres muestras de 30 g cada una por saco de alimento.

2. Diseño experimental

A fin de comprobar la capacidad competitiva de la FBNC y su inocuidad, las aves se dividieron en cuatro grupos de 40 pollitos cada uno, ubicándose en dos grupos por baterías (A y B) dispuestos de a 20 en cada piso.

El pretratamiento consistió en la administración de 0,5 ml/ave de FBNC directamente en la ingluvia.

En el caso del desafío se administró directamente en la ingluvia un concentrado de 105 células de S. typhimurium por ave.

En la Batería A., se ubicaron los siguientes grupos:

Grupo 1 (G1). Pretratados al día de edad y en el cual se quería controlar la inocuidad de la FBNC.

Grupo 2 (G2). Testigo. Sin pretratamiento ni desafío, a fin de comprobar la ausencia de patologías ajenas a la estudiada y excluir infecciones laterales por S. typhimurium. En la Batería B se distribuyeron los grupos 3 y 4.

Grupo 3 (G3). Experimental: Pretratados al día de edad y posteriormente desafiados al tercer día de edad. Su objetivo era evidenciar la capacidad de EC de la FBNC.

Grupo 4 (G4). Control de la cepa S. typhimurium. Desafiados al tercer día de edad. Con este grupo se comprobaba la infecciosidad o patogenicidad de la cepa desafío. Veinte pollitos de cada grupo fueron marcados y enumerados con autocrotal y con ellos se efectuó un control bacteriológico seriado, los días 7, 10, 13, 16, 23 y 30.

El control se hizo a través de tórulas cloacales individuales y dos muestras de focas de 5 g cada una, recolectadas de la bandeja de cada grupo.

3. Análisis Estadístico. Los resultados del aislamiento de S. typhimurium a partir de tórulas cloacales, se sometieron a una prueba de hipótesis de independencia de chicuadrado (X2) con p < 0,001. Se compararon los resultados de los grupos 3 y 4.

Resultados

Las muestras colectadas previo a la experiencia (macerado de los ciegos de las aves adultas, alimento y vísceras de los pollitos) resultaron negativas al aislamiento de salmonelas.

En el cuadro 1 se resumen los resultados obtenidos del examen bacteriológico de las focas frescas y tórulas cloacales. En el se puede observar que los grupos 1 y 2, se mantuvieron libres de S. typhimurium durante toda la experiencia, en cambio, en los grupos 3 y 4 fue posible aislar S. typhimurium de las focas sólo en el primer control efectuado al grupo 3 y durante toda la experiencia en las aves del grupo 4.

CUADRO 1 AISLAMIENTO DE SALMONELLA TYPHIMURIUM DE TORULAS  CLOACALES (TC) Y FECAS (F) DE POLLITOS PRETRATADOS Y NO PRETRATADOS  CON FLORA BACTERIANA NORMAL DEL CIEGO Y CON O SIN DESAFÍO CON  S. TYPHIMURIUM

EDAD

G 1

G 2

G 3

G 4

(días)

TC

F

TC

F

TC

F

TC

F

-

%

 

%

 

%

 

%

 

7

0

-

0

-

10

+

100

+

10

0

-

0

-

10

-

100

+

13

0

-

0

-

10

-

95

+

16

0

-

0

-

5

-

95

+

23

0

-

0

-

0

-

60

+

30

0

-

0

-

0

-

60

+

-  muestras negativas + muestras positivas G 1 Pretratados al día de edad G 2 Sin ningún tratamiento G 3 Pretratados al día de edadal y desafiados con  S. Typhimurium al tercer día. G 4 Desafiados con S.Typhimurium al tercer dia de  edad.

Las tórulas cloacales de las aves del grupo 3, dieron dos aislamientos positivos a S. typhimurium hasta el día 13, luego uno el día 16, para luego, ser negativas en los controles siguientes. En el grupo 4 los pollitos fueron, en su totalidad, positivos en los dos primeros controles; luego en los dos siguientes, disminuyeron a 19 y finalmente a 12 en los dos últimos.

No hubo mortalidad de aves durante toda la experiencia.

El análisis estadístico de los resultados del examen bacteriológico de las tórulas cloacales, para p < 0,001, demostró que existe una significativa relación entre la presencia de FBNC y la resistencia de los pollitos a la infección con S. typhimurium.

Discusión

En el grupo 3, las muestras de fecas del primer control fueron en su totalidad positivas al aislamiento de S. typhimurium y luego negativas en el segundo control hasta el final del ensayo. El examen de las tórulas cloacales de este mismo grupo entregó aislamientos positivos hasta el día décimosexto. Esto significa que las muestras de fecas no evidenciaron la excreción de S. typhimurium de dos aves enfermas. En relación a esto, Weinack y Cols., (1979) demostraron que la cantidad de salmonelas excretadas por las aves pretratadas es pequeña, por lo que una muestra tomada de un grupo de aves puede no evidenciar la presencia de S. typhimurium. Las tórulas cloacales, en cambio, por ser muestras individuales, son más sensibles para detectar pequeñas cantidades de S. typhimurium. El hecho que la primera muestra de fecas fuese positiva concuerda con los resultados obtenidos por Lloyd y Cols., (1977), quierres determinaron que el inóculo del desafío puede excretarse vivo por un tiempo determinado; sin que ello signifique enfermedad en el ave.

Las aves del grupo 4 excretaron S. typhimurium durante todo el ensayo, en estas aves no hubo mortalidad, pero sí síntomas clínicos de la infección, como diarrea acuosa. Esto se explica por una baja letalidad de la cepa, la cual es capaz de producir síntomas sin mortalidad; en cambio se aprecia una excelente capacidad infectiva ya que el 100 % de las aves se infectaron, quedando un porcentaje alto de ellas como portadoras.

El análisis estadístico mostró que existe una significativa relación entre el pretratamiento con FBNC y la resistencia de las aves a la infección con S. typhimurium. Este fenómeno ha sido demostrado por varios autores como: Lloyd y Cols. (1977) y Snoeyenbos y Cols. (1978).

Finalmente es interesante destacar que se necesita una mayor investigación acerca de fenómenos de exclusión competitiva, en relación a la identificación de las especies bacterianas de mayor importancia que participan en él.

Referencias

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HUGHES, K.L. Recent knowledge of the strict anaerobes of the gut, Aust. Vet. J. 48: 508-513, 1972.

LLOYD, A.G.; R.B., CUMMING; R.D., KENT. Presentation of Salmonella typhimurium infection in poultry by pretreatment of chickens and poult with intestinal extracts. Aust. Vét. J. 53: 82-87, 1977.

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SALANITRO, J.P.; J.G., FAIRCHILDS; P.A., MUIRHEAD. Intestinal microflora of the broiler chicken. In: West Poult. Dis. Conf. 22nd and.7th Poult Health Symp. Davis. Calif. ed. Agric. Ext. University of California. Procceedings. Davis, 1973 pp. 86-90.

SNOEYENBOS, G.H.; O.M., WEINACK; C.F.. SMYSER. Protecting chicks and poultry from Salmonella by oral administration of normal gut microflora. Avian Dis. 22: 273-278, 1978.

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Aceptado para su publicación. 12 Diciembre 1985.