Trabajos Originales

  • Penetración de espermatozoos bovinos en mucus cervical y su relación con algunas características seminales en diferentes sistemas de descongelación

Resumen

Se estudió el comportamiento de la penetración espermática en mucus cervical bovino y su relación con algunas características seminales en tres siste­mas de descongelación de semen. Para ello se utili­zó mucus bovino obtenido en el período estral reali­zándose las penetraciones en la cámara de Kremer. El material seminal consistió en 42 dosis cíe semen congelado de un toro, las que se descongelaron según tres sistemas (40°C por 10 segundos, 75°C por 6 segundos y temperatura ambiente por 10 mi­nutos), determinándose además la motilidad y anor­malidades espermáticas en el semen descongelado. Se determinó también la densidad y anormalidades de los espermatozoides en el mucus cervical.

El sistema de descongelación a temperatura am­biente tuvo las menores motilidades, penetración y densidades, las que fueron diferentes a los otros sistemas de descongelación (P < 0,05) no encon­trándose diferencias en las variables antes mencio­nadas entre los sistemas de descongelación rápida (40°C por 10 segundos y 75°C por 6 segundos). No se observaron diferencias en las anormalidades es­permáticas entre los tres sistemas de descongela­ción, tanto en el semen como dentro del mucus. Al comparar la morfología de los espermatozoides en el mucus cervical y en el semen descongelado, se encontró que las anormalidades dentro del mucus fueron menores, lo que indica un posible efecto 'filtro' del mucus cervical. La penetración esper­mática se asoció positivamente con la motilidad progresiva y negativamente con las anormalidades espermáticas.

Abstract

The pattern of sperm penetration in bovine cervical mucus was studied along with its relationship with seminal characteristics in three thawing systems. Bovine estral mucus was used and penetration tivas performed in a Kremer chamber. Semen samples consisted of 42 doses of frozen semen belongin to one bull wich were thawed according to three systems (40°C for 10 second; 75°C for 6 seconds and room temperature for 10 minutes). Motility and sperm abnormalities were determined in the thawed semen. Density and sperm abnormalities in cervical mucus were also studied.

Thawing at room temperature showed the lowest motility, penetration and density (p  0.05). No differences were found in the mentioned variables between the fast thawing systems. There were no differences in spermatic abnormalities between the three thawing systems in semen or in mucus. When a comparison was made of sperm morphology in mucus and thawed semen, abnormalities in mucus were less, indicating a possible 'filter' effect at the cervical mucus. Sperm penetration was positively associated with progressive movement and negatively with sperm abnormalities.

Abstract

Se estudió el comportamiento de la penetración espermática en mucus cervical bovino y su relación con algunas características seminales en tres siste­mas de descongelación de semen. Para ello se utili­zó mucus bovino obtenido en el período estral reali­zándose las penetraciones en la cámara de Kremer. El material seminal consistió en 42 dosis cíe semen congelado de un toro, las que se descongelaron según tres sistemas (40°C por 10 segundos, 75°C por 6 segundos y temperatura ambiente por 10 mi­nutos), determinándose además la motilidad y anor­malidades espermáticas en el semen descongelado. Se determinó también la densidad y anormalidades de los espermatozoides en el mucus cervical.

El sistema de descongelación a temperatura am­biente tuvo las menores motilidades, penetración y densidades, las que fueron diferentes a los otros sistemas de descongelación (P < 0,05) no encon­trándose diferencias en las variables antes mencio­nadas entre los sistemas de descongelación rápida (40°C por 10 segundos y 75°C por 6 segundos). No se observaron diferencias en las anormalidades es­permáticas entre los tres sistemas de descongela­ción, tanto en el semen como dentro del mucus. Al comparar la morfología de los espermatozoides en el mucus cervical y en el semen descongelado, se encontró que las anormalidades dentro del mucus fueron menores, lo que indica un posible efecto 'filtro' del mucus cervical. La penetración esper­mática se asoció positivamente con la motilidad progresiva y negativamente con las anormalidades espermáticas.

Abstract

The pattern of sperm penetration in bovine cervical mucus was studied along with its relationship with seminal characteristics in three thawing systems. Bovine estral mucus was used and penetration tivas performed in a Kremer chamber. Semen samples consisted of 42 doses of frozen semen belongin to one bull wich were thawed according to three systems (40°C for 10 second; 75°C for 6 seconds and room temperature for 10 minutes). Motility and sperm abnormalities were determined in the thawed semen. Density and sperm abnormalities in cervical mucus were also studied.

Thawing at room temperature showed the lowest motility, penetration and density (p  0.05). No differences were found in the mentioned variables between the fast thawing systems. There were no differences in spermatic abnormalities between the three thawing systems in semen or in mucus. When a comparison was made of sperm morphology in mucus and thawed semen, abnormalities in mucus were less, indicating a possible 'filter' effect at the cervical mucus. Sperm penetration was positively associated with progressive movement and negatively with sperm abnormalities.

Contenido

Los sistemas de evaluación potencial de la fertilidad generalmente se remiten a exámenes de semen, lo que si bien aporta valiosa información, permite conocer solo una de las partes involucradas en el proceso coito-fecundación. Es por ello que ha despertado interés poder disponer de pruebas 'in vitro' para estudiar algunos de los procesos involucrados en este fenómeno y poder estimar así en forma más certera la fertilidad.

Entre las pruebas que han adquirido importancia y difusión están los métodos de penetración espermática 'in vitro'; es así como se han realizado pruebas de penetración espermática en mucus cervical (Montironi y col., 1981; Amite y col., 1982; Moghissi y col., 1982; Bueno y col., 1987) o en gel de poliacrilamida (Lorton y col., 1981; Arzumendi, 1985).

El objetivo de la presente investigación es determinar las relaciones existentes entre motilidad progresiva del semen bovino descongelado en tres sistemas diferentes y anormalidades espermáticas, con penetración, densidad y anormalidades morfológicas de los espermatozoos en el mucus cervical, empleando la prueba de penetración espermática en el mucus cervical.

Material y métodos

La prueba de penetración espermática se realizó mediante el método de Kremer (1965). El mucus cervical se obtuvo de hembras bovinas sanas en período estral. El mucus se caracterizó según Mog­hissi (1977), en elasticidad, celularidad, pH y pe­netración espermática en placa, determinándose además consistencia y cristalización. Las muestras de mucus cervical fueron colectadas y mantenidas en vasos precipitados estériles a 4°C, de acuerdo a Katz y col. (1978), retirándose sólo para el llenado de los tubos capilares.

Las pruebas de penetración se realizaron en tu­bos capilares para microhematocrito los que se lle­naron con mucus por medio de aspiración, cada tubo se selló en uno de los extremos con masilla para moldear, dejándose en el extremo libre una pequeña protrusión de mucus que constituye la zona por la cual los espermatozoos penetran. La cámara de penetración empleada fue la descrita por Kremer (1965), la que se mantuvo durante el ensayo dentro de una cámara de incubación a 39°C.

El material seminal utilizado se obtuvo de 42 pajuelas plásticas (0,5 cc) de semen congelado (30 x 106 espermatozoos por dosis) provenientes de un toro de fertilidad probada. Las pajuelas se descon­gelaron según los siguientes sistemas: a 40°C por 10 segundos; a 75°C por 6 segundos y a temperatura ambiente (21°C) por 10 minutos. Inmediatamente después se estimó la motilidad progresiva (%) y luego se procedió a realizar frotis con el fin de determinar las anormalidades espermáticas. Una vez descongelada la muestra, el depósito de la cá­mara fue llenado en un volumen constante de 0,1 cc de semen, registrándose como momento inicial (tiempo 0), aquel en que se produce el contacto entre el mucus y el semen. Los tiempos de lectura se realizaron a los 15, 30 y 45 minutos para proceder a determinar microscópicamente la distancia máxima de penetración de los espermatozoos de vanguar­dia; este valor se expresó en milímetros. Una vez finalizada la prueba, se estimó la densidad espermá­tica dentro del tubo capilar (número de espermato­zoos por campo de microscopio) a los 5, 10, 15 y 20 mm del tubo.

Posteriormente, el tubo se seccionó a los 5, 10 y 15 mm (segmentos) para extraer el contenido y realizar frotis correspondientes a cada segmento para la determinación de las anormalidades esper­máticas dentro del mucus. Además, fueron deter­minadas las anormalidades del semen recién des­congelado (fuera de mucus) para cada sistema de descongelación. Estas anormalidades fueron agru­padas en: anormalidades de acrosoma (GA), anor­malidades de cuello, tracto intermedio y cola (GB) y anormalidades espermáticas totales (GC). Los frotis fueron teñidos con Giemsa (Díaz y Arancibia, 1971).

El estudio estadístico se realizó mediante análi­sis de varianza y las medias fueron comparadas empleando la prueba de Student Newman y Keuls. Se realizaron, además, correlaciones, regresiones simples, polinomiales y múltiples, entre algunas variables en estudio. Los valores expresados en porcentaje fueron previamente transformados se­gún la fórmula de C.I. Bliss: ángulo = arco seno porcentaje. Asimismo, los valores de densidad es­permática fueron transformados a raíz cuadrada pa­ra distribuciones tipo Poisson truncados (Sokal y Rohlf, 1969).

Resultados

La penetración espermática promedio para todo el ensayo fue de 29, 155 mm a los 45 minutos. Los resultados para los respectivos sistemas de descongelación se encuentran expresados en el cuadro 1.

CUADRO 1 PENETRACIÓN ESPERMÁTICA (mm) A LOS 45 MINUTOS EN MUCUS CERVICAL BOVINO EN TRES SISTEMAS DE CONGELACIÓN DE SEMEN

Sistema de descongelación

N

DE

CV (%)

40°C por 10 seg

14

32,170a

8,803

27,35

75°C por 6 seg

14

32,789a

11,535

35,18

T° ambiente por 10 min

14

22,500b

13,024

57,88

Total

42

29,155

11,970

41,05

Los subíndices diferentes indican diferencias estadísticas (p < 0,05).

Se encontraron diferencias significativas (p < 0,05) entre los sistemas de descongelación a 40°C por 10 segundos y temperatura ambiente por 10 minutos e igualmente entre 75°C por 6 segundos y temperatura ambiente, no encontrándose diferencias entre los sistemas a 40°C por 10 segundos y 75°C por 6 segundos, los cuales presentaron un comportamiento similar. Al analizar las funciones de regresión expresados en el gráfico 1 se puede observar que b1 y b2 de ambos sistemas de descon­gelación son muy similares.

Gráfico 1. Penetración espermática (mm) bajo tres sistemas de descongelación. volver

La penetración en la descongelación a temperatura ambiente fue muy inferior a la obtenida con los otros dos sistemas, presentando una tendencia más lineal y menos acelerada, lo que se aprecia en el valor de los b.

La densidad espermática tuvo una media de 7,49 espermatozoos por campo. El sistema de desconge­lación a temperatura ambiente fue diferente a los de 40°C y 75°C (p < 0,05), no existiendo diferencias entre los sistemas de 40°C y 75°C. Esta característica resulta similar a la penetración espermática, encontrándose una densidad espermática levemente mayor para el sistema rápido de descongelación a altas temperaturas (75°C por 6 segundos) en relación al sistema de 40°C por 10 segundos. La descongelación a temperatura ambiente tuvo densidades muy inferiores a los otros sistemas (cuadro 2). Las funciones de regresión obtenidas para los diferentes sistemas de descongelación no se ajusta­ron a un modelo lineal ni cuadrático y, por lo tanto, no se expresan gráficamente.

CUADRO 2 DENSIDAD ESPERMÁTICA –ESPERMATOZOOS/CAMPO,EN MUCUS CERVICAL BOVINO, EN TRES SISTEMAS DE DESCONGELACIÓN DE SEMEN

Sistema de descongelación

N

DE

CV (%)

40°C por 10 seg

56

7,676a

4,110

53,54

75°C por 10 seg

54

8,322a

4,814

57,84

T° ambiente por 10 min

42

6,197b

3,527

56,88

Total

152

7,497

4,280

57,192

Los subíndices diferentes indican diferencias estadísticas (p < 0,05)

La motilidad progresiva promedio para todo el ensayo fue de 43,7%. La motilidad obtenida en descongelación a 40°C por 10 segundos y 75°C por 6 segundos fue superior (p < 0,05) a la obtenida en el sistema de temperatura ambiente por 10 minutos (cuadro 3).

CUADRO 3 MOTILIDAD ESPERMÁTICA PROGRESIVA  EN MUCUS CERVICAL BOVINO, EN TRES SISTEMAS DE DESCONGELACIÓN DE SEMEN

Sistema de descongelación

N

DE

CV (%)

40°C por 10 seg

14

51.717a

5,043

10,91

75°C por 6 seg

14

54,609a

8,051

14,74

T° ambiente por 10 min

14

24,878b

8,332

33,49

Total

42

43,735

15,369

35,14

Los subíndices diferentes indican diferencias estadísticas (p < 0,05)

Las anormalidades promedio obtenidos en semen recién descongelado, como dentro de mucus para todo el experimento fueron de GA: 16,08; GB: 8,38 y de GC: 18,54 (cuadro 5). No se encontraron diferencias significativas entre los tres sistemas de descongelación para anormalidades de GA, GB y GC del semen descongelado y dentro del mucus. Sin embargo, se encuentran diferencias altamente significativas (p < 0,001) entre las anormalidades espermáticas fuera y dentro del mucus, tanto para GA, GB, GC encontrándose una disminución sus­tancial en la cantidad de espermatozoos morfológicamente anormales dentro del mucus cervical (cuadro 4).

CUADRO 4 volver ANORMALIDADES ESPERMÁTICAS FUERA Y DENTRO DE MUCUS CERVICAL BOVINO EN LOS SISTEMAS DE DESCONGELACIÓN DE SEMEN

  Fuera de Mucus (Semen descongelado) Dentro de Mucus
Sistema de descongelación N DE CV(%) N DE CV(%)
40ºC por 10 seg
GA 14 21,767 2,579 11,84 42 14,029 4,361 31,08*
GB 14 13,095 1,610 12,29 42 7,038 3,787 53,80*
GC 14 25,956 2,741 10,56 42 10,015 5,305 32,12*
75ºC por 6 seg
GA 14 19,951 3,658 18,33 41 13,899 3,870 27,84*
GB 14 12,722 1,981 15,57 41 6,693 2,439 36,44*
GC 14 24,851 3,419 13,75 41 15,602 4,134 20,49*
Tº ambiente por 10 min
GA 14 22,127 3,822 17,27 38 14,965 4,000 31,17*
GB 14 13,907 1,258 9,05 38 6,305 2,475 39,25*
GC 14 26,671 3,290 17,35 38 16,433 5,050 30,76*
Total
GA 42 21,282 3,451 10,21 121 14,279 4,292 30,05*
GB 42 13,241 1,679 12,68 121 6,691 2,797 44,49*
GC 42 25,800 3,179 12,30 121 16,006 4,828 30,14*
Asteriscos indican diferencias significativas (P < 0,001) entre anormalidades fuera y dentro de mucus en le mismo sistema de descongelación y dentro del mismo tipo de anormalidad: GA: Anormalidades de acrosoma y cabeza; GB: Anormalidades de cuello, tracto intermedio y cola; GC: Anormalidades totales.

Las anormalidades espermáticas dentro del mucus tuvieron una tendencia a disminuir en la medida que aumentaba la distancia intracapilar (cuadro 5), encontrándose un aumento de las anormalidades de GA y GC en la última sección estudiada (10 a 15 mm); sin embargo, GB si bien tuvo una tendencia a disminuir en los tres segmentos realizados, las dife­rencias entre los segmentos no fueron significativas.

CUADRO 5 ANORMALIDADES ESPERMÁTICAS EN SEMEN Y MUCUS CERVICAL BOVINO SEGÚN DISTANCIA INTRACAPILAR

- N

DE C (%)
Semen descongelado  
GA 42 21,282 3,451 16,21
GB 42 13,241 1,679 12,68
GC 42 25,826 3,179 12,30
Primer segmento mucus (0-5 mm)
GA 42 15,125 3,505 23,17a
GB 42 7,252 2,280 31,43c
GC 42 16,969 3,713 21,80d
Segundo segmento (5-10 mm)
GA 42 12,177 3,928 29,80b
GB 42 6,460 2,873 44,47c
GC 42 14,883 4,533 30,45e
Tercer segmento (10-15 mm)
GA 37 14,568 5,245 36,00a
GB 37 6,315 3,694 58,49c
GC 37 16,190 5,999 37,05dc
Total
GA 163 16,083 5,109 31,76
GB 163 8,379 3,942 47,04
GC 163 18,537 6,915 33,41

Los subíndices indican diferencias estadísticas (P < 0,05) entre segmentos. GA: anormalidades de acrosoma y cabeza; GB: anormalidades de cuello, tra- cto inter­medio y cola; GC: anormalidades totales.

La densidad espermática, especialmente en los primeros tramos del tubo, se encuentra estrechamente correlacionada con la penetración espermática y la motilidad progresiva. Además, las anormalidades se encuentran respectivmente correlaciona­das con la penetración espermática (cuadro 6).                   

CUADRO 6 volver CORRELACIONES ENTRE PENETRACIÓN ESPERMÁTICA, MOTILIDAD PROGRESIVA Y DISTANCIA INTRACAPILAR CON ANORMALIDADES ESPERMÁTICAS Y DENSIDADES ESPERMÁTICAS EN MUCUS CERVICAL BOVINO

-

Penetración espermática

progresiva intracapilar

Motilidad Distancia

Anormalidades de acrosoma y cabeza

-0,4259**

-0,0385

-0,0595

Anormalidades de cuello, tracto

-

intermedio y cola

-0,2760*

-0,0723

-0,1295

Anormalidades morfológicas totales

-0,4089**

0,0109

-0,0717

Penetración espermática

=

0,6006***

-

Densidad 5 mm

0,6970***

0,6725***

-

Densidad 10 mm

0,7581***

0,3752*

-

Densidad 15 mm

0,7581***

0,3752*

-

Densidad 20 mm

0,7700**

0,2205

-

*     Significancia (p < 0,05) **  Significancia (p < 0,01) *** Significancia (p < 0,001)

Discusión

De acuerdo a estos resultados, la penetración esper­mática tuvo un comportamiento acelerado al inicio, para disminuir luego en forma paulatina a los 45 minutos (gráfico l). Este comportamiento no lineal de la penetración espermática se asemejó a lo obte­nido por Ulstein (1972) y Kesseru (1973), en mucus cervical y por Arzumendi (1985) en gel de poliacri­lamida.

Kummerfeld y col. (1980) trabajando con se­men congelado de toro encontraron un rango pro­medio de penetración de 13,3 mm a 28,7 mm a los 10 minutos. Mediante las funciones de regresión calculadas en el presente trabajo, se pudo establecer que las penetraciones espermáticas promedio a los 10 minutos en los sistemas de descongelación de 75°C por 6 segundos y 40°C por 10 segundos, fueron similares al rango inferior reportado por el citado autor. Las penetraciones promedio en estos dos sistemas son semejantes a los obtenidos por Ulstein (1972) para semen humano a los 30 minutos postmigración, y a los de Kummerfeld y col. (1981) quienes encontraron una distancia de migración pa­ra semen congelado bovino de 17,5 mm a los 15 minutos de incubación a 37°C. Beltrán (1985) obtu­vo una distancia de penetración de espermatozoos bovinos de vanguardia de 39,5 mm después de una hora de incubación. Después de los 40 minutos la penetración espermática se estabiliza (gráfico l) lo que indica que el tiempo de estimación de la pe­netración no debiera exceder los 45 minutos.

Tredway y col. (1978) al trabajar en pruebas postcoitales (penetración in vivo) determinaron que la cantidad de espermatozoos contenidos dentro del mucus cervical estaba influenciada por la motilidad espermática. Situación que concuerda con los resul­tados de este estudio, en que la motilidad progresiva del semen descongelado según los tres sistemas se asoció fuertemente con densidad espermática, es­pecialmente en los primeros segmentos del tubo capilar donde las correlaciones obtenidas fueron de 0,67 y 0,61 (cuadro 6). Esto explicaría en parte las diferencias en densidad espermática encontradas en los sistemas de descongelación utilizados, ya que a temperatura ambiente por 10 minutos se obtuvieron las menores motilidades y consecuentemente las densidades espermáticas más bajas. Los sistemas de descongelación a alta temperatura en tanto tuvie­ron las mayores motilidades y densidades espermá­ticas. Un comportamiento similar al descrito para la densidad, se encuentra entre la penetración esper­mática y motilidad progresiva cuyas correlaciones indican un alto grado de asociación entre estas ca­racterísticas.

En el presente trabajo se confirma el efecto nega­tivo sobre la penetración espermática, densidad y motilidad progresiva del sistema de descongelación a temperatura ambiente en comparación con los sistemas de descongelación rápida en bovinos (Robbins y col., 1972; Olar y col., 1977; Fleming y col., 1976; Senger y col., 1976). Este efecto desfa­vorable no se presentó para las anormalidades mor­fológicas (GA, GB y GC) en los tres sistemas de descongelación tanto fuera como dentro del mucus cervical (cuadro 4).

Independientemente de los sistemas de descon­gelación utilizados en el presente trabajo, las anor­malidades espermáticas totales dentro del mucus cervical fueron 37,9% menores que las encontradas en semen recién descongelado. Resultados simila­res obtuvieron Bueno y col. (1987) al trabajar en mucus y semen bovino, reportando una disminu­ción en las anormalidades de 44,4% y Arzumendi (1985), utilizando gel de poliacrilamida como mu­cus sintético obtuvo un descenso en las anormalida­des espermáticas de 34,4%. Ehrenfeldt y Gross (1985) al trabajar con mucus cervical bovino alma­cenado a -196°C por 180 días y semen bovino descongelado, concluyen que los espermatozoos que migran a través del mucus presentaban un por­centaje significativamente menor de anormalidades al agruparlos con el semen inicial, considerando por tanto al mucus cervical como un filtro biológico.

Las anormalidades de cuello, tracto intermedio y cola, que constituyen la porción de mayor impor­tancia en la motilidad intrínseca del espermatozoi­de, disminuyeron en mayor porcentaje que las anor­malidades de acrosoma y cabeza (cuadro 4), encon­trándose sólo un 50,5% de las anormalidades conte­nidas en el semen recién descongelado. Al respec­to, Jeulin y cols. (1985) afirman que la selección espermática por el mucus cervical está basada en la integridad morfológica del aparato motriz. Este efecto de filtro que tendría el mucus cervical en términos de seleccionar o impedir el paso de los espermatozoos morfológicamente anormales, tal como ocurrió en este trabajo, puede entenderse bajo el mecanismo discutido por Davajan y Kharma (1970) donde la migración de los espermatozoides por los espacios o canales de agua y material en soluciones existente entre las macromoléculas del mucus cervical, seleccionaría los espermatozoos con adecuada morfología y motilidad. Además, hay que tomar en consideración los cambios morfológi­cos que los espermatozoos puedan sufrir dentro del mucus. La 'selección' de los espermatozoides que se produce en el mucus se deduce además por los valores de las correlaciones negativas y las anorma­lidades.

La alta correlación existente entre la motilidad progresiva y la penetración espermática revela que la primera característica, y aún siendo estimada en forma subjetiva está vigente como factor de estima­ción de la fertilidad (cuadro 6). Por otra parte, la motilidad progresiva y la penetración espermática están altamente correlacionadas con la densidad espermática, especialmente en los primeros tramos.

A la luz de los antecedentes aportados en el presente estudio los sistemas de calificación de se­men congelado podrían ser enfocados para sistemas de descongelación rápida, incubando la muestra en mucus por 45 minutos y evaluar los espermatozoi­des de vanguardia a una distancia no más allá de los 10 mm del tubo capilar.

Referencias

AMITE, A.; A. BERGMAN, G. YEDWAB M.P. DAVID, T.Z. HO­MONNAL, G. PAZ. Human sperm penetration into cervical mucus in vitro: Correlation between its quality, penetration capacity and velocity. Gynecol. Obstet. Invest. 14: 283-291, 1982.

ARZUMENDI, G.G. Comportamiento de la penetración espermáti­ca de semen en gel de poliacrilamida y su relación con algunas características espermáticas. Tesis. Santiago. Es­cuela de Ciencias Veterinarias y Pecuarias. Universidad de Chile, 1985.

BELTRÁN, P.B. Migración espermática en mucus cervical bovi­no, almacenado a - 196°C como parámetro de calificación seminal. Tesis. Valdivia, Escuela de Medicina Veterinaria, Universidad Austral de Chile, 1983.

BUENO, L.E.; A. BERNAL, W. VON FREY, L.H. BOSSHARD; G. ARZUMENDI, C. BARROS. Estudio de anormalidades esper­máticas bovinas pre y postmigración en mucus cervical bovi­no fresco y medio de cultivo. J. Vet. Med. A. 34, 782-789, 1987.

DAVAJAN, V.; K. KHARMA. Spermatozoa transport in cervical mucus. Obstet. Gynecol. Surv. 25: 1-43, 1970.

DÍAz, H.; C. ARANCIBIA. Calificación de la fertilidad potencial de los animales domésticos. Santiago, Chile. Imprenta Vera Gianini, 1971.

EHRENFELDT, J.; O. GROSS. Test de migración espermática en mucus cervical y su relación con anormalidades espermáti­cas. loa Reunión de la Sociedad Chilena de Producción Animal. Valparaíso, Chile. 3-4 octubre, 1985, p. 167.

FLEMING, W.N.; T.T. OLAR, J.R. MITCHELL. Techniques for evaluation of frozen bovine semen at Curtiss Breeding Servi­ce. In: Proceeding of the Sixth Technical Conference on Artificial Inseminal and Reproduction. Milwaukee, Feb­may, p. 20-21, 1976.

JEULIN, C.A.; A. SOUMAH, P. JOUANNET. Morphological factors influencing the penetration of human sperm into cervical mucus in vitro. Int. J. Androl. 8: 215-223, 1985.

KATZ, D.F.; R.N. MILIS, T.R. PRITCHETT. The movement of human spermatozoa in cervical mucus. J. Reprod. Fert. 53: 259-265, 1978.

KESSERU, E. In vivo sperm penetration and in vitro sperm migra­tion test. Fertil. Steril. 24: 584-591, 1973.
KREMER, J.A. Simple sperm penetration test. Int. J. Fertil. 10: 209-215, 1965.

KUMMERFELD, H.L.; S.P. LORTON, R.H. FoOTE. Relationship of bull fertility to sperm migration and motility. J. Androl. 1: 81, 1980.

KUMMERFELD, H.L.; S.P. LORTON, R.H. FOOTE. Relationship of spermatozoal migration in cervical mucus to bovine fertility. J. Androl. 2: 103-107, 1981.

LORTON, S.P.; H.L. KUMMERFELD, R.H. FOOTE. Poliacrilamide as a substitute for cervical mucus in sperm migration test. Fertil. Steril. 35: 222-225, 1981.

MOGHISSI K.S. Significance and pronostic value of post coital test. In: The uterine cervix in reproduction. Ed.: V. Insler and G. Bette Stuttgart George Thieme. Pub., p. 231, 1977. MOGHISSI, K.S.; S. SEGAL, O.

MEINHOLD, S.J. AGRONOW. In vitro sperm cervical mucus penetration. Studies in human and bovine cervical mucus. Fertil. Steril. 37: 823-827, 1982.

MONTIRONI, P.C.; A. LANZA, M. FEDELE, M. BALERNA, A. CAMPAÑA. Il. Test di penetrazione in vitro el moco cervicale ello studio della coppia sterile. Minerva Ginecol. 33: 325­335, 1981.

OLAR, T. T.; W. C. BECKER, P. C. SENGER. Effect of thawing rate and cold post-thaw temperature in bovine semen packaged in glass ampules. J. Anim. Sci. 44: 95-101, 1977.

ROBBINS, K.; L.E. GERBER, R.G. SAACKE. Influence of thaw rate on maintenance of the acrosomal cap. J. Anim. Sci. 35: 253, 1972.

SENGER, P.L.; W.C. BECKER, J.K. HILLERS. Effect of the tha­wing rate and post-thaw temperature on motility and acroso­mal maintenance in bovine semen frozen in plastic straws. J. Anim. Sci. 42: 932-936, 1976.

SOKAL, R.R.; J.F. ROHLF. Biometry. San Francisco, Freeman, 1969. 384-395.

TREDWAY, D.R.; C.C. BUCHANAN, T.S. DRAKE. Comparison of the fractional post coital test and semen analysis. Am. J. Obstet. Gynecol. 130: 647-652, 1978.

ULSTEIN, M. Evaluation of a capillary tube sperm penetration method for fertility investigation. Acta Obstet. Gynecol. Scand. 51: 287-292, 1972.

Recibido en abril de 1988, aprobado en diciembre de 1988.