• Virus bronquitis infecciosa aviar unido a fase sólida para detección de anticuerpos específicos en pruebas de ELISA
Andrew N. (MV) Collingwood-Selby, Haroldo (MV) Toro G.

Resumen

Se desarrolló una prueba de ELISA ('enzyme-linked immunosorbent assay') empleando virus de la bronquitis infecciosa aviar sin purificar en la sensibilización de las microplacas. Los resultados indican diferencias en sensibilidad y especificidad de la prueba al emplear microplacas de diferente origen comercial. El medio de sensibilización salina fosfato (PBS) a pH 7,4 demostró inducir una mayor adhesión de este antígeno a la microplaca sobre otros buffers probados. La dilución del material viral en el medio de sensibilización también demostró constituir un factor de variación en las lecturas con los mismos sueros de referencia. De acuerdo al contenido proteico (0,887 µg/µl) y el título infectante del material viral (106.25 EID50/ml) empleado en este trabajo, se estableció que una dilución 40% (v/v) en el 'buffer' determinaba una mayor sensibilidad en la prueba. Al comparar microplacas sensibilizadas de esta forma con microplacas sensibilizadas con antígeno purificado de origen comercial, se observó una sensibilidad mayor de ELISA con las últimas. A pesar de ello, se determinó que microplacas sensibilizadas con VBIA sin purificar demuestran una sensibilidad que podría permitir su uso en la elaboración de perfiles serológicos rutinarios en planteles avícolas comerciales. Finalmente, el proceso de congelación de las microplacas así sensibilizadas no alteró mayormente los resultados de ELISA en sensibilidad y especificidad.

Abstract

An enzyme-linked immunosobent assay (ELISA) was performed using infections bronchitis virus (IBV) infected alantoic fluid for the sensitization of microplates. Microplates of different commercial origin showed different sensitivity and specificity when assessing the same reference sera. Phosphate buffer saline (PBS) pH 7.4, used as coating buffer, induced highest adsorption rates of this antigen to the plates. The dilution factor of IBV in the coating buffer showed to induce optical density variations when testing reference sera. In this study, according to the protein content (0.887 µg/µl) and infectivity of the viral material (10/6.25 EID50/ml), a 40% (v/v) dilution factor gave highest sensitivity. Microplates sensitized with purified IBV from a commercial source showed a higher sensitivity than microplates coated with non purified IBV. However, sensitivity of microplates sensitized as described herein could be used for routine profiling of antibody prevalence in poultry farms. Finally, freezing of IBV coated microplates did not influence significantly optical densities obtained with reference sera.

Palabras clave

Bronquitis infecciosa aviar, ELISA

keywords

Avian infectious bronchitis, ELISA

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