Trabajos Originales

  • Estudio comparativo de protección producida por algunas vacunas al administrarlas individual y simultáneamente

Resumen

Con el fin de conocer si existen diferencias en las respuestas protectoras consecutivas a la administración de vacunas aplicadas individual y simultáneamente a otras, se sometió a seis grupos de cobayos a vacunaciones contra carbunclo bacteridiano, enterotoxemia por Clostridium perfringens, rinotraqueítis infecciosa bovina y rabia, las que se aplicaron bajo los dos esquemas citados.

La evaluación de las respuestas protectoras se realizó 30 días después de la vacunación y se basó en pruebas de desafío para los cobayos vacunados contra carbunclo bacteridiano, pruebas de neutralización del efecto tóxico-hemolítico para los vacunados contra enterotoxemia, prueba de seroneutralización para los cobayos vacunados contra rinotraqueítis y pruebas de seroneutralización y desafío para los cobayos vacunados contra rabia.

Los resultados obtenidos indican que no existen diferencias significativas en la capacidad protectora otorgada por las vacunas usadas, cuando éstas se aplican en forma individual o simultáneamente.

Palabras Claves

Vacunas, carbunclo bacteridiano, enterotoxemia a Cl. perfringens, rinotraqueítis infecciosa bovina, rabia

Abstract

In order to know the protective response after the individual and simultaneous application of vaccines, six groups of guinea pigs were vaccinated against anthrax, enterotoxemia caused by Clostridium perfringens, infectious bovine rhinotracheitis and rabies. The evaluation was performed 30 days after vaccination by using challenge test with the guinea pigs vaccinated against anthrax and rabies, and neutralization test in the animals vaccinated against enterotoxemia, infectious bovine rhinotracheitis and also rabies.

It was not found significative differences in the protective response confered by the use of these vaccines applied in the individual or simultaneous form in a guinea pig model. It is discussed the obtained results.

Keywords

Vaccines, anthrax, enterotoxemia, infectious bovine rhinotracheitis, rabies

Introducción

En la actualidad se recurre con frecuencia a la aplicación de varias vacunas diferentes, aprovechando un mismo rodeo u ocasión, vacunas que se pueden administrar mezcladas en un solo inóculo (vacunas combinadas), o bien en forma independiente cada vacuna, pero aplicadas en la misma oportunidad (vacunas simultáneas). Esta práctica persigue minimizar los problemas de estrés que se producen cada vez que se administra una vacuna. Entre estos problemas se pueden citar aquellos originados por reacciones anafiláxticas o tóxicas debidas a la introducción de elementos extraños al animal, inflamaciones locales debidas al trauma de inoculación o a la introducción de componentes antigénicos o de adyuvantes, reacciones generales como dolor y fiebre, estrés de rodeo, deshijamiento, etc. (Horsch, 1984; Pinochet y Ábalos, 1989).

Las vacunas combinadas y simultáneas se han usado desde hace bastante tiempo en la prevención de enfermedades clostridiales, enfermedades virales de aves y especialmente en caninos (Lacheretz, 1988). Además se han usado frecuentemente frente a enfermedades que obedecen a causas complejas donde participa más de un agente infectante, como son algunos problemas respiratorios del bovino o complejos diarreicos en cerdos (Desméttre, 1985).

En el hombre el uso de vacunaciones combinadas es una práctica corriente, especialmente en niños (Beneson, 1983).

Al administrar vacunas combinadas o simultáneas, se pueden presentar incompatibilidades o interferencias que impidan la generación de una buena respuesta inmunitaria, para el o los agentes contra los que se desea proteger (Tizard, 1987). Una de las interferencias más conocidas se describe en la vacunación simultánea contra bronquitis infecciosa y la enfermedad de Newcastle de las aves, interferencia que incluso ha sido utilizada para diagnóstico (Hidalgo y col., 1985).

Se ha postulado tradicionalmente que las vacunas preparadas con organismos vivos, bacterianos o virales, provocan en general reacciones locales o sistémicas de intensidad variable, las que por el estrés producido atenuarían o reducirían las respuestas a otras vacunas que le acompañan en forma combinada o simultánea (Horsch, 1984).

Por lo citado, previamente al uso de una vacunación combinada o simultánea, debe conocerse si existe riesgo de interferencia o competencia antigénica.

En los últimos años se han desarrollado ampliamente los sistemas de explotación intensiva de ganado bovino y ovino. La alta concentración de animales implica tener la masa protegida frente a una serie de enfermedades infecciosas que son propias o comunes de presentarse en este tipo de manejo.

Las vacunaciones contra carbunclo bacteridiano, enterotoxemia y rinotraqueítis infecciosa bovina (RIB) son de uso obligado en prácticamente todos los países que concentran los bovinos. La gran mayoría de los países latinoamericanos, especialmente aquellos con áreas tropicales, agregan la vacunación antirrábica a este esquema (Kimberling, 1988; M.M.W.R., 1989).

Basados en estos antecedentes, el objetivo de esta experiencia es conocer si la administración de las vacunas anteriormente citadas, aplicadas en forma simultánea, permite obtener para cada una de ellas una respuesta protectiva igual a aquella que se obtiene cuando se usan estas mismas vacunas en forma individual. Ante la imposibilidad práctica de utilizar bovinos para realizar este estudio, se empleó un modelo de cobayos.

Material y métodos

Se emplearon 203 cobayos machos, albinos, cepa Pirbright1, de 400 a 450 g de peso. Previo a la experiencia, se extrajo sangre de cada uno de ellos y sus sueros fueron sometidos a pruebas para determinar presencia de anticuerpos antitoxina hemolítica de Clostridium perfringens tipo A, antivirus herpes bovino (VHB-1), y antivirus rábico. Las pruebas empleadas se describen más adelante.

Los cobayos fueron agrupados al azar, bajo el siguiente esquema:

Grupo A (vacunado contra carbunclo). Formado por 23 cobayos que recibieron vacuna contra el carbunclo bacteridiano, Bacillus anthracis Cepa Sterne, vía subcutánea, en dosis equivalente a 5.000 esporas (García Carrillo, 1977). Grupo B (vacunado contra C. perfringens). Formado por 29 cobayos que recibieron la vacuna contra Clostridium perfringens que incluye el tipo A, vía subcutánea y en la dosis de 1,5 ml, calculada previamente como protectora. Grupo C (vacunado contra RIB). Formado por 28 cobayos que recibieron la vacuna contra rinotraqueítis infecciosa bovina, aplicada por vía subcutánea y en dosis de 2,0 ml, calculada en estudios previos como protectora. Grupo D (vacunado contra rabia). Formado por 26 cobayos que recibieron la vacuna antirrábica, tipo Fuenzalida-Palacios, vía intramuscular y en dosis de 2,0 ml (Dentone, 1966). Grupo E (vacunado simultáneamente). Formado por 57 cobayos que recibieron cada una de las mismas vacunas y en iguales dosis que las recibidas por los cobayos de los grupos A, B, C y D, pero en este caso aplicadas todas simultáneamente (en la misma ocasión, pero en diferente inóculo). Todas las vacunas se aplicaron vía subcutánea a excepción de la antirrábica que se aplicó vía intramuscular. Grupo F (control no vacunado). Formado por 40 cobayos, que se utilizan como control y que sólo recibieron la inoculación de un placebo.

Treinta días postvacunación, los cobayos de todos los grupos fueron sometidos a una nueva sangría y en la misma oportunidad, los cobayos y/o sus sueros sometidos a las siguientes pruebas:

Todos los cobayos del grupo A, 25 cobayos del grupo E y 10 del grupo F, fueron sometidos a desafío con una suspensión de Bacillus anthracis Cepa Pasteur IV con un título equivalente a 100 DML50 (dosis mínima letal 50), inoculada subcutáneamente. Los animales fueron observados por 15 días para verificar la ocurrencia de muertes; de aquellos que murieron se obtuvo muestra para verificar la presencia de la cepa de desafío (García Carrillo, 1977). Los sueros de todos los cobayos del grupo B, 25 del grupo E y 10 del grupo F, fueron sometidos a una prueba de seroneutralización de las toxinas hemolíticas de Clostridium perfringens.  Se utilizó 3 DMH (dosis mínima hemolítica), de toxina completa de Cl. perfringens tipo A, preparada según Sterne y Batty (1978), la que se enfrentó a cantidades decrecientes de suero de los cobayos en estudio. Luego de incubar por una hora a 37°C, se comprobó el efecto inhibitorio de la hemólisis frente a una suspensión de glóbulos rojos de ratón al 5%. Los sueros de todos los cobayos del grupo C, 25 del grupo E y 10 del grupo F, fueron sometidos a la prueba de neutralización para comprobar la respuesta serológica frente al VHB-1, usando la técnica de Jenney y Wesman (1976) y utilizando como antígeno el VHB-1 cepa Puente Alto 77 (Berríos y col., 1979). Los sueros de los cobayos de los grupos D, 25 del grupo E y 10 del grupo F, fueron sometidos a la prueba de neutralización para determinar respuesta inmune al virus rábico, según la técnica de Atanasiu (1976) utilizando como antígeno virus rábico fijo, cepa CVS (Challenge Virus Standar). El suero de referencia tenía un título de 120 unidades internacionales, de acuerdo al suero control de OPSiOMS. Los cobayos de estos mismos grupos fueron además, sometidos a un desafío empleando virus rábico a títulos de 56, 560 y 5.623 DML50 aplicadas por vía intracerebral. El diagnóstico de muerte por rabia se realizó por pruebas de inmunofluorescencia en cortes de encéfalo según técnica de Dean y Abelseth (1976).

La comparación de los resultados entre los grupos A y E fue realizada en base a la prueba de chi cuadrado y la comparación de los resultados entre los grupos B, C y D con el grupo E, realizada en base a una prueba de 't'.

__________

Nota

1 Procedente del Bioterio del Instituto de Salud Pública. volver

 

 

Resultados

— Vacunación contra carbunclo bacteridiano. Después del desafío de los cobayos con Bacillus anthracis, se produjeron muertes de éstos en las cantidades que se indican en el cuadro 1.

CUADRO 1 MORTALIDAD POSTDESAFÍO DE COBAYOS VACUNADOS CONTRA CARBUNCLO BACTERIDIANO

Grupo n Cobayos muertos
A (vacunado carbunclo) 23 13
E (vacunado simultáneo) 25 13
F (control no vacunado) 10 10

Las muertes de los cobayos desafiados ocurrieron entre los días 3 a 8 postdesafío en el grupo A, entre los días 3 a 5 en los cobayos del grupo E y entre el primer y segundo día en los cobayos del grupo F. El número de cobayos muertos en el grupo A y en el E, no mostró diferencias significativas (p ≥ 0,05).

— Vacunación contra toxinas de Clostridium perfringens tipo A. Los cobayos de los grupos vacunados con diferentes esquemas mostraron anticuerpos inhibidores de la acción hemolítica de las toxinas de Clostridium perfringes tipo A, con títulos que se presentan en el cuadro 2.

CUADRO 2 EFECTO ANTITÓXICO HEMOLÍTICO EN SUERO DE COBAYOS VACUNADOS CONTRA CLOSTRIDIUM PERFRINGENS TIPO A

Grupo n Título antihemolítico
1:2 1:4 1:8
B (vacunado C. perfringens A) 29 23 4 2
E (vacunado simultáneamente) 25 21 3 1
F (control no vacunado) 10 0 0 0

Las diferencias entre los resultados de los títulos antihemolíticos de los sueros de los cobayos de los grupos B y E no fueron significativas (p ≥ 0,05).

— Vacunación contra rinotraqueítis infecciosa bovina. Los títulos neutralizantes contra VHB-1 de los sueros de los cobayos de los grupos vacuna dos con diferentes esquemas se presentan en el cuadro 3.

CUADRO 3 TÍTULOS SERONEUTRALIZANTES DE COBAYOS VACUNADOS CONTRA RINOTRAQUEITIS INFECCIOSA BOVINA

- Grupo Títulos Seroneutralizantes
n 0 2 4 8 16 32 64
C (vacunadoRIB) 28 1 4 6 7 7 2 1
E (vacunado simultáneo) 25 1 1 3 4 8 5 3
F (control no vacunado) 10 10 0 0 0 0 0 0

Los títulos neutralizantes de sueros de cobayos vacunados fluctuaron entre 2 y 64. Considerando a los títulos menores de 2 como negativos, los resultados de los grupos C y E, no mostraron diferencias significativas (p ≥  0,05). En el gráfico 1 de frecuencia relativa acumulada, se observa que el título de anticuerpos seroneutralizantes (código), es mayor para la inmunización utilizando la aplicación simultánea (E), con respecto a la aplicación de esta vacuna en forma individual (C). La variación porcentual media (50%) fue de un 25,6%.

 

Gráfico 1. Frecuencia relativa acumulada 50% de títulos de anticuerpos seroneitralizantes contra virus rinotraqueítis infecciosa bovina de cobayos vacunados en forma individual y simultánea con otras vacunas. * Expresión título de anticuerpos seroneutralizantes.

— Vacunación contra la rabia.  En el cuadro 4 se presentan los resultados de los desafíos con virus rábico de los cobayos de los grupos vacunados contra la rabia en los diferentes esquemas utilizados.

CUADRO 4 MORTALIDAD POSTDESAFÍO DE COBAYOS VACUNADOS CONTRA RABIA

Grupo n Desafío (DML50) Cobayos muertos
D (vacunado rabia) 9 8 9 56--- 560--- 5.623--- 0 0 1
E (vac. simultáneo) 9 8 9 56--- 560--- 5.623--- 0 0 2
F (control no vac.) 3 3 4 56--- 560--- 5.623--- 3 3 4
  Se observa en este cuadro que sólo un cobayo del grupo D y 2 del grupo E mueren por el desafío y estos 3 casos frente a la más alta dosis desafiante. Contrariamente, las diferentes DML50 empleadas, incluso las menores, provocaron la muerte de la totalidad de los cobayos del grupo F o control. Las diferencias de los resultados entre los grupos D y E no fueron significativas (p ≥  0,05).   En el gráfico 2 se observa que el título de anticuerpos neutralizantes expresado en unidades internacionales, es mayor para la inmunización individual con la vacuna antirrábica, respecto a la aplicación de esta vacuna en forma simultánea con otras. La variación porcentual media (50%) fue el 31,76%.  

Gráfico 2. Frecuencia relativa acumulada 50% de anticuerpos antirrábicos en cobayos, expresada en Unidades Internacionales, vacunados contra rabia en forma individual y simultánea con otras vacunas.

Discusión

La imposibilidad de utilizar bovinos en esta experiencia, además del factor económico, obedeció a factores técnicos y de infraestructura que no permiten realizar desafíos en esta especie, sea con virus rábico o con Bacillus anthracis. Es de esperar entonces que la respuesta protectiva desarrollada en cobayos, debida a las vacunaciones practicadas, sea similar a aquella que se produciría en el bovino sometido a un idéntico tratamiento.

La utilización del cobayo como modelo para estudio de eficacia de vacunas ha sido practicada tradicionalmente desde hace varios años, tanto en carbunclo bacteridiano, como en enfermedades clostridiales y en rabia (Dentone, 1966; García Carrillo, 1977; Sterne y Batty, 1978; Vodopija y col., 1985). El empleo del cobayo como modelo para estudios de rinotraqueítis infecciosa bovina no se había experimentado aún y fue necesario previamente verificar la dosis de vacuna suficiente para provocar una respuesta sérica con títulos neutralizantes considerados como protectivos.

La elección de las vacunas empleadas se basó principalmente en combinar diferentes elementos antigénicos, en diversos estados y presentación. Es así como se usó una vacuna bacteriana viva (anti carbunclo bacteridiano), una bacterina-toxoide absorbida en hidróxido de aluminio (vacuna contra la enterotoxemia a Clostridium perfringens), una vacuna preparada con virus inactivado asociada a un coadyuvante oleoso (vacuna contra la rinotraqueítis infecciosa bovina) y una vacuna preparada con virus inactivado por irradiación ultravioleta (vacuna contra la rabia).

Las vacunas incluidas en la experiencia son empleadas en forma rutinaria en los bovinos, frente a problemas que son frecuentes y de gran incidencia económica y sanitaria.

Las pruebas de desafío y las técnicas de laboratorio que se emplearon para comprobar protección, corresponden en general a las usadas por los servicios de control de calidad de vacunas, privados y oficiales.

Las vacunas que se administraron simultáneamente perseguían simular una combinación con las otras vacunas, ya que si bien se aplicaron en una misma oportunidad, no lo fueron en un mismo inóculo. El impedimento de mezclar vacunas obedeció a varios factores y entre ellos es importante citar: el gran volumen que se obtendría al mezclar los productos, las diferentes vías de aplicación que se recomiendan para algunas vacunas de las utilizadas, como la antirrábica (uso intramuscular), el hecho de que algunas vacunas incluían vehículos o adyuvantes que juntos podrían haber provocado reacciones inflamatorias o granulomatosas indeseables y principalmente a que el formol empleado como inactivante de las toxinas clostridiales en la vacuna contra enterotoxemia podría haber alterado la viabilidad de la vacuna anticarbunclosa. Todos estos factores considerados han sido ya citados como importantes, cuando se pretende preparar o utilizar vacunas (Duffus, 1989).

Los resultados de la vacunación simultánea e individualmente aplicadas, demostraron que las diferencias no eran estadísticamente significativas respecto a la capacidad de protección que otorgaban. Sin embargo, en algunas pruebas realizadas fue posible observar diferencias en el grado o intensidad de esta protección. Esto permite adicionar alguna información de importancia. Por ejemplo, el lapso de sobrevivencia postdesafío en carbunclo bacteridiano, fue mayor en los cobayos del grupo vacunado individualmente (8 días). En rinotraqueítis infecciosa bovina, los títulos más altos de seroneutralización corresponden a los cobayos del grupo con vacunación simultánea; inversamente en rabia, los títulos más altos aparecen en el grupo de cobayos vacunados individualmente.

La asociación o combinación de vacunas se ha practicado con éxito desde hace años y son innumerables los productos que cumplen con esta condición. Generalmente los mismos laboratorios productores realizan las pruebas de control.

Los antecedentes de vacunación simultánea son escasos y están relacionados con la práctica de terreno más que con experiencias debidamente controladas. Será el médico veterinario, entonces, quien deberá conocer previamente cuáles vacunas son susceptibles de ser aplicadas simultáneamente, para tener la seguridad de obtener una protección adecuada para cada una de ellas.

Agradecimientos

Los autores agradecen a los laboratorios Rhodia Merieux de Chile. PROVAC Ltda. y al Instituto de Salud Pública de Chile por el aporte de sus productos en la realización de este trabajo.

Referencias

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Recibido el 23 de abril de 1992, aprobado el 10 de septiembre de 1992.