La leucosis enzoótica bovina (LEB) es una enfermedad infecto contagiosa de origen viral que se caracteriza por su fácil diseminación en los rebaños lecheros (Ferrer, 1979; Blood y col., 1986). La enfermedad es producida por un virus de la familia Retroviridae, subfamilia Oncovirinae, el que tiene un diámetro de 70-120 nm y se encuentra formado por una nucleocapside y una envoltura glicoproteica con dos glicoproteínas antigénicas gp 30 y gp 50 (Graves y col., 1977; Ferrer, 1979; González y col., 1988).
El virus de la LEB afecta al tejido linforreticular y produce en el huésped una infección permanente (Baumgartener y col., 1975; Huber y col. 1981 b; Ferrer, 1982 y Levin y col., 1988). Se disemina en los rebaños a través de diferentes vías tales como leche, calostro, saliva, semen, secreciones nasales, genitales y sangre. La ejecución de algunos procedimientos de manejo común en el ganado tales como el descorre, vacunaciones, tatuaje, transferencia de embriones y palpación transrectal, pueden causar la transmisión del virus entre los animales (Bech-Nielsen y col., 1978; Horvath y col., 1984; Straub, 1984 a; Lucas y col., 1985; Monke, 1986; Hopkins y col., 1988).
Además de los factores ya señalados, actualmente se considera que los insectos hematófagos pueden transmitir la enfermedad especialmente en países con clima tropical (Weber y col., 1988; Manet y col., 1989).
La infección de un ternero recién nacido está condicionada por las tasas de anticuerpos contra el virus de la LEB (VLB). La inmunidad pasiva previene la infección de los animales después del nacimiento por 3-6 meses, dependiendo de la cantidad de calostro ingerida y de la concentración de anticuerpos de él. Sin embargo, el calostro también puede ser portador de virus, pero esta situación es poco frecuente (Straub y col., 1984 b).
Debido a la importancia que tendría el calostro, como fuente de inmunidad pasiva durante los primeros meses de vida de los bovinos, se estudió la ingesta de calostro proveniente de hembras serológicamente positivas al VLB en terneros desde el nacimiento hasta los 6 meses de edad. La determinación de anticuerpos contra el VLB se realizó por el método de inmunodifusión en gel de agar y por un ensayo inmunoenzimático.
Financiamiento por proyecto FONDECYT 90-0173 |
Se utilizaron 12 terneros Holstein recién nacidos, 6 de los cuales eran hijos de hembras serológicamente positivas al VLB y 6 terneros hijos de hembras serológicamente negativas al VLB.
A los terneros se les suministró calostro según el siguiente esquema:
De los 6 animales hijos de hembras positivas al virus, 3 consumieron calostro de sus propias madres y 3 consumieron calostro de hembras negativas al VLB. De los 6 terneros hijos de hembras negativas al virus, 3 consumieron calostro de sus madres y 3 consumieron calostro de hembras positivas al VLB.La determinación de hembras positivas al VLB se realizó 60 días antes del parto, usando como método de diagnóstico la prueba de inmunodifusión en gel de agar IGA y enzima inmunoanálisis (ELISA).
Los animales a las 24 horas postparto, después de haber ingerido calostro según el esquema establecido, fueron llevados a la maternidad y mantenidos en jaulas individuales. Los terneros fueron alimentados con sustituto de leche* 4 litros diarios por 90 días, heno de alfalfa de 2º corte ad libitum y concentrado** de acuerdo a las normas convencionales de crianza artificial de terneros. Durante el período de estabulación (6 meses) se realizó un control periódico de insectos con K-Othrina ***.
A todos los animales se les extrajo sangre de la vena yugular, cada 30 días, para la determinación de anticuerpos, por los métodos de IGA y ELISA utilizando kit del laboratorio IFFA Merieux.
Los resultados de la prueba de IGA fueron interpretados visualmente, considerándose como sueros positivos aquellos que presentaron una banda de precipitación nítida entre el antígeno y la muestra
Los resultados de la prueba de ELISA se obtuvieron en un lector Mini Reader II y se expresaron como porcentaje de competición, considerándose como suero positivo aquellos con porcentaje de competición superior a 30%, sospechosos 24-30% y negativos menos de 24%.
__________
Notas
* | Sprayfo Blue. volver |
** | Concentrados Cisterna Crianza I y II. volver |
*** | Lab. Hoechst. volver |
El cuadro 1 presenta los resultados obtenidos al realizar la prueba de IGA y ELISA en terneros que ingirieron calostro de hembras serológicamente positivas a LEB.
CUADRO 1 ANTICUERPOS CALOSTRALES ANTI-VLB DE SEIS TERNEROS HIJOS DE MADRES SEROPOSITIVAS Y SERONEGATIVAS ALIMENTADOS CON CALOSTRO POSITIVO
ANIMALES |
MESES |
|||||
1 ELISA*-IGA** |
2 ELISA-IGA |
3 ELISA-IGA |
4 ELISA-IGA |
5 ELISA-IGA |
6 ELISA-IGA |
|
1 |
100 (+) |
98 (+) |
93 (+) |
91 (+) |
71 (-) |
31 (-) |
2 |
100 (+) |
98 (+) |
96 (-) |
79 (-) |
50 (-) |
20 (-) |
3 |
100 (+) |
100 (-) |
98 (-) |
89 (-) |
60 (-) |
1 (-) |
4 |
91 (+) |
81 (-) |
66 (-) |
35 (-) |
27 (-) |
9 (-) |
5 |
98 (+) |
96 (+) |
96 (+) |
86 (-) |
22 (-) |
12 (-) |
6 |
100 (+) |
96 (+) |
94 (+) |
76 (+) |
61 (-) |
35 (-) |
1, 2, 3: Hijos de hembras seropositivas. 4, 5, 6: Hijos de hembras seronegativas. * :ELISA % de competición 30% (+); 24-30% (sospechoso); 24% (-). ** :IGA Inmunodifusión doble en gel de agar. |
A los 30 días (1er control) todos los animales resultaron positivos a ambas pruebas. A los 60 días, 4/6 animales fueron positivos a IGA y 6/6 a ELISA, siendo a los 90 y 150 días 3/6 animales positivos a IGA y 6/6 a ELISA. A los 150 y 180 días todos los animales fueron negativos a la prueba de IGA y 4/6 y 2/6 positivos a ELISA, respectivamente.
En el cuadro 2 se presentan los resultados de las pruebas de IGA y ELISA en los terneros que ingirieron calostro de hembras serológicamente negativas al VLB. En él se observa que todos los animales durante el ensayo fueron negativos a la prueba de IGA y ELISA.
CUADRO 2 ANTICUERPOS ANTI-VLB DE TERNEROS HIJOS DE MADRES SEROPOSITIVAS Y SERONEGATIVAS ALIMENTADOS CON CALOSTROS NEGATIVO
ANIMALES | MESES | |||||
1 ELISA*-IGA** | 2 ELISA-IGA | 3 ELISA-IGA | 4 ELISA-IGA | 5 ELISA-IGA | 6 ELISA-IGA | |
7 | 14 (-) | 13 (-) | 15 (-) | 16 (-) | 12 (-) | 8 (-) |
8 | 18 (-) | 16 (-) | 15 (-) | 9 (-) | 16 (-) | 14 (-) |
9 | 18 (-) | 19 (-) | 20 (-) | 18 (-) | 19 (-) | 16 (-) |
10 | 9 (-) | 12 (-) | 13 (-) | 11 (-) | 12 (-) | 14 (-) |
11 | 7 (-) | 9 (-) | 10 (-) | 11 (-) | 9 (-) | 12 (-) |
12 | 18 (-) | 16 (-) | 13 (-) | 12 (-) | 13 (-) | 13 (-) |
7, 8, 9: Hijos de hembras seropositivas. 10, 11, 12: Hijos de hembras seronegativas. * ELISA % de competición 30% (+); 24-30% sospechoso 24% (-). ** IGA Inmunodifusión doble en gel de agar. |
Al comparar los resultados obtenidos por la prueba de IGA y ELISA (Figura 1) se puede observar que ambas detectaron anticuerpos a los 30 días en todos los animales que ingirieron calostro de hembras positivas a LEB, para posteriormente la prueba de ELISA detectara más animales positivos por un mayor período de tiempo que la prueba de IGA.
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Figura 1. Número de animales positivos detectados por el test de enzimo inmunoanálisis (ELISA) e inmunodifusión en gel de AGAR (IGA): |
La determinación de anticuerpos anti-VLB por el método de IGA y ELISA en sueros de terneros que consumieron calostro de hembras serológicamente positivas al VLB, demuestra que los animales adquieren una inmunidad pasiva que se manifiesta a los 30 días de edad con altas tasas de anticuerpos, ya que el porcentaje de competencia obtenido por la prueba de ELISA es de un 100 %. Esta tasa de anticuerpos disminuye en el tiempo, y a los 6 meses sólo 2 animales son positivos al test de ELISA con un porcentaje de competencia del 31 y 35%, lo que demostraría que la seropositividad que presentan los animales es debido a una inmunidad de carácter pasivo (Van der Maaten y col., 1981).
Se sabe que los títulos de anticuerpos específicos en los terneros depende del volumen de calostro, composición y tiempo de administración postparto, estimándose que 1.000 ml de calostro ingerido en las primeras 12 horas de vida del animal son suficientes para producir títulos de anticuerpos en los terneros, similares a los de las madres (Matheus y Straub, 1982). Los títulos de anticuerpos obtenidos en los terneros a los 30 días son similares a los determinados en las hembras 60 días antes del parto, lo que demuestra que la cantidad y calidad del calostro ingerido es el adecuado, ya que terneros hijos de madres seropositivas no presentan anticuerpos anti VLB si la ingesta de calostro no es adecuada (Villouta y col., 1984). Posteriormente, el número de animales positivos al VLB disminuye, existiendo a los 6 meses de edad sólo dos animales seropositivos al VLB por el método de ELISA.
Al comparar los resultados obtenidos mediante la prueba de IGA y ELISA los resultados indican que ambas pruebas tienen la misma especificidad. Sin embargo, la prueba de ELISA presenta una mayor sensibilidad (Figura 1), detectándose 15 sueros positivos al VLB por el método de IGA y 30 sueros positivos por el método de ELISA, lo que es corroborado por diferentes autores que señalan que el test de ELISA, permite detectar bajas concentraciones de anticuerpos, debido a su alta sensibilidad (Mammerick y col., 1984, Florent, 1988).
Seis de los animales del ensayo eran hijos de hembras seropositivas al VLB; sin embargo, sólo los alimentados con calostro de hembras positivas presentaron anticuerpos contra VLB, los que disminuyeron en el tiempo, lo que descartaría en los animales la transmisión transplacentaria o inmediata después del parto, la cual es considerada como una vía de baja incidencia en la transmisión de la enfermedad (Straub, 1971; Van der Maaten y col., 1982; Ferrer, 1982; Monke, 1986).
Los seis animales que ingirieron calostro de hembras seronegativas al VLB no presentaron anticuerpos contra VLB durante el período del ensayo. Éste demuestra que el manejo sanitario y nutricional de los animales, impidió una posible transmisión de la enfermedad, ya sea por contacto de los animales o por acción de insectos hematófagos, los cuales serían una fuente importante de transmisión del virus (Weber y col., 1988 y Manet y col., 1989).
En base a los resultados obtenidos se puede concluir que el consumo de calostro de hembras seropositivas al VLB produce en los terneros una seroconversión, la cual varía con el tiempo, ya que disminuye hasta los 6 meses de edad, el método de ELISA es más sensible en la detección de los anticuerpos anti-VLB.
En las condiciones de manejo y nutricional en el que se mantuvieron los animales durante el ensayo se controla la transmisión del virus.
BAUMGARTENER, L.; C. OLSON; MILLER, J. Y VAN DER MAATEN M. 1975. Survay for antibodies to Leukemia (C-type) virus in cattle. J. Am. Vet. Med. Assoc. 166: 249-251. |
BECH-NIELSEN, S.; Piper, C. y Ferrer, J. 1978. Natural mode of transmission of the bovine leukemia virus: Role of bloodsucking insects. Am. J. Vet. Res. 39:1089-1092. |
BLOOD, D.; HENDERSON, J. y RADSOTITS, O. 1986. Leucosis Viral Bovina (L.V.B.)(Linfosarcoma Bovino, Leucosis Bovina Enzoótica) Medicina Veterinaria. (6a Ed) México A.F. pp 795-803. |
DEVARE, S. G.; STEPHENSON, J.R.; SARMA, P.S.; AARONSON, S.A.; CHANDER, S. 1976. Bovine lymphosarcoma: Development of a radioimmunologic technique for detection of the etiologic agent. Science 194:1428-1430. |
FERRER, J. F.; MARSHAK, R. R.; ABT, D. A.; KENYON, S. J. 1979. Relationship between lymphosarcoma and persistent lymphocytosis in cattle: a Review. J. Am. Vet. Med. Assoc. 175:705-708. |
FERRER, J. F. 1982. La leucosis bovina y su agente causal. IICA Salud AnimaL. Pub]. Científica N° 1. San José de Costa Rica. |
FLORENT, G. 1988. An ELISA for the diagnosis of bovine leukaemia virus infection. Vet. Rec. 123:570-571. |
GONZÁLEZ, E.T.; OLIVA, G.A. y ETCHEVERRIGARAY, M.E. 1988. Leucosis Bovina: Principales características del agente etiológico y de la enfermedad. Monografías Med. Vet. 10:19-28. |
GRAVES, D.; DIGLIO, C. y FERRER, J. 1977. A reverse transcriptasa assay for detection of the bovine leukemia virus. Am. J. Vet. Res. 38:1739-1744. |
HOPKINS, S.; EVERMAN, J.; DI GIACOMO, R.; PARISCH, S.; Fe RRER, J.; SMITH, S. y BANGERST, R. 1988. Experimental transmission of bovine leukosis virus by simulated rectal palpation. Vet. Rec. 122:389-391. |
HORVATH, Z.; FERENCZ, G. y KAJTAR, J. 1984. The role of blood sampling needles in the transfer of Enzootic Bovine Leukosis. In: O. C. Straub (Ed). Fifth International Symposium on Bovine Leukosis. A Symposium in the CEC program of coordination of research on animal pathology. Tübingen. pp.306-310. |
HUBER, N.; DI GIACOMO, R.; EVERMANN, J. Y STUDER, E. 1981 a. Bovine leukemia virus infection in a large Holstein herd: Cohort analysis of the prevalence of antibody-positive cows. Am. J. Vet. Res. 42:1477-1481. |
HUBER, N.;DI GIACOMO, R.; EVERMANN, J. Y STUDER, E. 1981 b. Bovine leukemia virus infection in a large holstein herd: Prospective comparison of production and reproductive performance in antibody-negative and antibody-positive cows. Am. J. Vet. Res. 42:1474-1476. |
LEWIN, H.; CHE-WU, M.; NOLAN, T. y STEWART, J. 1988. Peripheral B lymphocyte percentage as an indicator of subclinical progression of Bovine Leukemia virus infection. J. Dairy Sci. 71:2526-2534. |
LUCAS, M.; ROBERTS, D. y WIBBERLEY, G. 1985. Ear tattoning as a method of spread of bovine leukosis virus infection. Brit. Vet. J. 141:647-649. |
MAMERICKX, M. y ROBERTS, D. 1984. Transmission and pathoenesis In: O. C. Straub (Ed) Fifth International Symposium of Bovine Leukosis. A. Symposium in the CEC programm of coordination of research on animal pathology. Tübingen. pp. 319. |
MANET, G.; GUILBERT, X.; ROUX, A.; VUILLAUME, A. Y PARODI, A. 1989. Natural mode of horizontal transmission of Bovine Leukemia Virus (B.L.V.): The potencial role of tabanids (tabanus spp.) Vet. Immun. Immunopathol. 2:255-263. |
MATHAEUS, W. y STRAUB, O. 1982. Immunoglobulin amounts and Leukosis-specific antibodies in calostrum, milk and serum in the periparturient period and their levels in the newborn. In: O. C. Straub (Ed). Fourth International Symposium on Bovine Leukosis. A Seminar in the EEC Programme of Coordination of research on animal pathology. Bologna. pp. 112-122. |
MONKE, D. 1986. Noninfectivity of semen from bulls infected with bovine leukosis virus. J. Am. Vet. Med. Assoc. 188:823-826. |
STRAUB, O. 1971. Ensayos sobre la transmission vertical de la Leucosis Bovina. Not. Med. Vet. 1:38. |
STRAUB, O. 1984a. The importance of the seropositive Dam's state for the transmission and spread of Enzootic Bovine Leukosis. In: O. C. Straub (Ed). Fifth International Symposium of Bovine Leukosis. A. Symposium in the CEC program of coordination of research on animal pathology. Tübingen. pp. 258-264. |
STRAUB, O. 1984 b. The role of calostrum and milk transmission of Enzootic Bovine Leukosis. In: O.C.Straub (Ed). Fifth International Symposium of Bovine Leukosis. A. Symposium in the CEC program of coordination of research on animal pathology. Tübingen. pp. 272-279. |
VAN DER MAATEN, M.; MILLER, J. y SCHMERR, M. 1981. In utero transmission of bovine leukemia virus. Am. J. Vet. Res. 42:1052-1054. |
VAN DER MAATEN, M.; MILLER, J. Y SCHMERR, M. 1982. Factors affecting the transmission of Bovine Leukemia virus from cows to their offspring. In: O. C. Straub (Ed). Fourth International Symposium on Bovine Leukosis. A seminar in the EEC Programme of Coordination of research on animal pathology. Bologna. pp. 225-240. |
VILLOUTA, G.; CORREA, J.; GONZÁLEZ, T., RUDOLPH, W.; RODRÍGUEZ, M. y CONTRERAS, H. 1984. Diagnóstico de la infección a virus leucemia bovina por dos pruebas comerciales de inmunodifusión y su relación con linfocitosis persistente. Ciencia e Investigación Agraria. 11: 223-226. |
WEBER, A.; MOON, R.; SORENSEN, D.; BATES, D.; MEISKE, J.; BROWN, C.; ROHLAND, N.; HOOKER, E. Y STRAND, W. 1988. Evaluation of the estable fly (Stomoxys Calcitrans) as a vector of Enzootic Bovine Leukosis. Am. J. Vet. Res. 49:1543-1549. |
Recibido el 10 de enero de 1992, aprobado el 16 de abril de 1992. |